تحليل PCR: ما هو؟ كيفية اتخاذ تحليل PCR

أنه منذ وقت ليس ببعيد وضعت طريقة موثوق بها، حساسة للغاية وسريعة لتشخيص مختلف الأمراض المعدية لدى البشر. وتسمى هذه الطريقة "تحليل PCR". ما هو عليه، ما هو جوهرها، ما يمكنه تحديد الكائنات الحية الدقيقة وكيفية اتخاذ ذلك، فإننا سوف تصف في هذه المقالة.

تاريخ الاكتشاف

اخترع تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) هو العالم الأمريكي كيري Myullis في عام 1983. في البداية، على براءة اختراع طريقة التشخيص من قبل "شركة قيطس"، والذي كان يعمل وخالقه. ولكن في عام 1992 تم بيع جميع الحقوق وبراءات الاختراع لشركة "هوفمان-لاروش". بعد ذلك، اتضح أن دراسات مماثلة أجريت في موازاة ذلك، وورد من قبل علماء الأحياء أمريكية أخرى، مثل إليس تشن، ديفيد إدغار، جون RRE. في عام 1980 انخرط في هذه القضية والعلماء السوفييت A. Slyusarenko A. Kaledin و S غوروديتسكي. لذلك، لتحديد ما لم يكن صاحب حق المؤلف الوحيد الممكن. وقد ساهمت العديد من علماء الكيمياء الحيوية البارزة في تطوير أساليب تفاعل البلمرة وCERN براءة اختراع ابتكاراتهم. في هذا التحليل نقطة PCR ونفذت في جميع أنحاء مختبرات مجهزة خصيصا.

ملخص PCR التشخيص

تحليل PCR: ما هو وكيف يعمل؟ جوهر الأسلوب يكمن في حقيقة أنه باستخدام خاص البلمرة إنزيم الحمض النووي في المختبر لزيادة في حجم البيئة الميكروبية محددة. للقيام بذلك مادة DNA مرارا المتاحة تتضاعف. وبالتالي، فإن وجود الممرض في عينة سيتم زيادة المبلغ في حساب التلاعب مختبر الكيمياء الحيوية، وسوف البكتيريا لا يكون من الصعب كشف في المجهر.

كيف هي دراسة المواد؟

لإجراء التحليل المطلوب:

• قالب DNA.
• الاشعال المواد ربط طرفي شظية.
• بالحرارة إنزيم البلمرة DNA.
• المواد الكيميائية، وضمان التشغيل السليم للإنزيمات.
• مطلوب حل العازلة لتهيئة الظروف المناسبة لنمو وتطوير المواد DNA.

لأداء PCR تعمل 25-30 يكرر تتكون من ثلاث خطوات: تمسخ، الصلب واستطالة.

لتحليل polimezarnoy سلسلة من ردود الفعل باستخدام جهاز خاص - cycler على. معدات حديثة تسمح لك لتثبيت أنابيب التدفئة والتبريد برنامج ضروري للقضاء على أخطاء أثناء التشخيص.

حيث لتطبيق التشخيص؟

تستخدم Polimezarnoy طريقة سلسلة من ردود الفعل في مختلف مجالات الطب:

• استخدام الطب الشرعي لتحديد المادة الوراثية، مثل الشعر أو اللعاب أو الدم.
• تحليل PCR الدم يساعد على التنميط الجيني، على سبيل المثال، للكشف عن الفردية استجابة زرعت الوراثية لدواء معين.
• بواسطة طريقة وضع الروابط الأسرية بين الناس.
• أصبحت أكثر رواجا PCR الأسلوب في التشخيص الطبي لتحديد الأمراض المعدية المختلفة.

ما التهابات يكشف PCR؟

وهكذا، منذ فترة طويلة تستخدم الدواء بنجاح تحليل PCR. ما هو عليه، تعلمنا بالفعل. وبعض مسببات الأمراض يمكن أن يتم الكشف عن معها؟ PCR تشخيص التالية العدوى :

• التهاب الكبد A، B، C،
• ureaplasmosis.
• المبيضات.
• الكلاميديا.
• داء المفطورات.
• التهاب المهبل البكتيري،
• كريات الدم البيضاء المعدية.
• داء المشعرات.
• عدوى فيروس الورم الحليمي البشري.
• السل؛
• عدوى الهربس من 1 ونوع 2ND.
• هيليكوباكتر بيلوري العدوى.
• الفيروس المضخم للخلايا.
• الدفتيريا.
• السالمونيلا.
• عدوى فيروس نقص المناعة البشرية.

أيضا، وتستخدم أساليب PCR في تشخيص السرطان.

مزايا الطريقة

التشخيص PCR ديها العديد من المزايا:

1. حساسية عالية. حتى مع وجود عدد قليل من جزيئات DNA الكائنات الحية الدقيقة يحدد تحليل PCR وجود عدوى. كما أنه يساعد طريقة للأمراض المزمنة والكامنة التي تحدث. في كثير من الأحيان في مثل هذه الحالات، والكائنات الحية الدقيقة وغير المزروعة في الطرق الأخرى.
2. من أجل التحقيق في أي مادة مناسبة، مثل اللعاب والدم والانتقاء الجنسي، والشعر، والخلايا الظهارية. والأكثر شيوعا هو اختبار دم ومسحة البولي التناسلي PCR.

3. لا تتطلب الثقافات المتزايد الموسعة. عملية مؤتمتة التشخيص تسمح للحصول على نتائج الدراسة بعد 4-5 ساعات.
4. هذه الطريقة تقريبا أصيلة تماما. سجلت حالات معزولة فقط من نتيجة سلبية كاذبة.
5. القدرة على تحديد عدة أنواع من مسببات الأمراض في المواد عينة واحدة. هذا يسرع ليس فقط بعملية تشخيص المرض، ولكن أيضا يقلل كثيرا من تكاليف مادية. في كثير من الأحيان، ويصف الطبيب إجراء تحليل شامل للPCR. مسح الأسعار، ويتألف من تحديد مسببات الأمراض الستة، حوالي 1500 روبل.

توصيات بشأن التحضير للتحليل

أن تكون النتائج صحيحة في حاجة إلى دراسات PCR لفحصها، بناء على توصيات من التحضيرات الأولية لتشخيص:

1. قبل تسليم اللعاب يجب الامتناع عن تناول الطعام والدواء لمدة 4 ساعات قبل أخذ عينات من المواد. مباشرة قبل الإجراء، وشطف فمك بالماء المغلي.
2. يجب أن يسترشد القواعد المذكورة أعلاه وعند أخذ عينة من داخل الخد. بعد الشطف ويوصى بإجراء تدليك خفيف على الجلد للافراج عن الإفرازات البروستاتا.
3. البول وعادة ما يتم جمعها في المنزل. للقيام بذلك، تحتاج إلى إجراء المرحاض شامل من الأعضاء التناسلية. في حاوية بلاستيكية معقمة هو ضروري لجمع 50-60 مل من البول. وأوصت للنساء لإدراج حشا في المهبل، والرجال قدر الإمكان لسحب الجلد أضعاف لضمان نقاء المادة. لا يمكنك أن تأخذ المواد أثناء الحيض.
4. للتسليم الحيوانات المنوية إلى الامتناع عن الجماع خلال 3 أيام قبل مجموعة من المواد. أيضا، وينصح الأطباء للتخلي عن استخدام الساونا وحمام ساخن والكحول والأطعمة الغنية بالتوابل. لمدة 3 ساعات قبل التحليل من الضروري الامتناع عن التبول.
5. لتمرير مسحة البولي التناسلي، على سبيل المثال، إذا كان التحليل على الكلاميديا PCR، كل من النساء والرجال من المستحسن أن بقية الجنسية لمدة 3 أيام. 2 أسابيع قبل التحليل لا يمكن أن المضادات الحيوية. لمدة أسبوع تحتاج إلى التوقف عن استخدام المواد الهلامية الحميمة والمراهم والتحاميل المهبلية، الغسل. يجب 3 ساعات قبل الدراسة الامتناع عن التبول. أثناء لم يتم تنفيذ الحيض المواد سياج للخروج، وبعد 3 أيام فقط من انتهاء اكتشاف أن تأخذ مسحة البولي التناسلي.

PCR أثناء الحمل

فترة الانتظار للطفل، والعديد من الأمراض المعدية، والأمراض المنقولة جنسيا، هي في غاية الخطورة لنمو الجنين الطبيعي. يمكن أن الأمراض المنقولة جنسيا يؤدي النمو داخل الرحم، والولادة قبل الأوان أو الإجهاض، والتشوهات الخلقية للطفل. لذلك، من المهم أن يحصل في مرحلة مبكرة من الحمل فحص PCR. اجتياز اختبارات ضروري عند التسجيل - ما يصل إلى 12 أسبوعا.

المواد السياج يأتي من قناة عنق الرحم مع الفرش الخاصة. هذا الإجراء هو مؤلم ولا يشكل خطرا على الطفل. عادة أثناء الحمل تحليل لطريقة الكلاميديا PCR، فضلا عن ureaplasmosis، داء المفطورات، الفيروس المضخم للخلايا، والهربس، فيروس الورم الحليمي. هذا مجمع فحص يسمى PCR 6.

PCR لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية

يرجع ذلك إلى حقيقة أن طريقة تفاعل البلمرة المتسلسل حساسة جدا للتغيرات في الجسم وشروط التشخيص، يمكن للعديد من العوامل التي تؤثر على النتيجة. لذلك تحليل PCR لفيروس نقص المناعة البشرية ليست وسيلة موثوق بها، كفاءتها - 96-98٪. 2-4٪ المتبقية من الاختبار يعطي نتائج إيجابية كاذبة.

ولكن في بعض الحالات بدون تشخيص PCR لفيروس نقص المناعة البشرية لا تستطيع أن تفعل. عادة، يتم ذلك للأشخاص الذين يعانون ELISA كاذبة سلبية. وتشير هذه الأرقام إلى أن الشخص لم تتطور بعد أجسام مضادة للفيروس والتي لا يمكن الكشف دون زيادة عدد متعددة. أن هذا لا يمكن أن يتحقق من خلال إجراء فحص الدم طريقة PCR.

هناك حاجة أيضا هو تشخيص للأطفال السنة الأولى من العمر، الذين يولدون لأمهات مصابات بفيروس نقص المناعة البشرية. والطريقة هي الطريقة الوحيدة لتحديد موثوق وضع الطفل.

PCR لتشخيص التهاب الكبد

البلمرة طريقة التفاعل المتسلسل يسمح الكشف عن الحمض النووي للفيروس التهاب الكبد A، B، C، أي قبل تشكيل الأجسام المضادة للعدوى أو ظهور الأعراض. ولا سيما فعالية هو تحليل PCR على التهاب الكبد C، منذ 85٪ من هذا المرض هي أعراض وبدون العلاج في الوقت المناسب تصبح مزمنة.

وكشف في الوقت المناسب من مسببات المرض يساعد على تجنب المضاعفات والعلاج على المدى الطويل.

المتكاملة PCR فحص

الشامل تحليل PCR: ما هو؟ هذا الفحص طريقة polimezarnoy سلسلة من ردود الفعل التي تشمل تحديد وقت واحد عدوى الأنواع عدة: المفطورة التناسلية، هومينيس الميكوبلازما، الغاردنريلة المهبلية، المبيضات، المشعرة، الفيروس المضخم للخلايا، urealitikum الميورة، الهربس 1 ونوع 2ND، السيلان فيروس الورم الحليمي. سعر هذا التشخيص يتراوح من 2000 إلى 3500 روبل. اعتمادا على العيادة والمواد والمعدات، وكذلك على نوع من التحليل: النوعي أو الكمي. ما هو مطلوب في حالتك - يقرر الطبيب. في بعض الحالات، ببساطة كشف عن وجود الممرض في بلدان أخرى، مثل فيروس نقص المناعة البشرية، والدور الهام الذي يلعبه عيار الكمي. يشار إليها باسم "تحليل PCR من 12" في تشخيص كل من فحص مسببات الأمراض أعلاه.

فك رموز نتائج التحليل

تحليل PCR النسخ واضح ومباشر. لا يوجد سوى 2 مقياس مؤشر - "ايجابية" و "سلبية". عند الكشف عن مسببات المرض يمكن للأطباء مع 99٪ الثقة -th تأكد من وجود المرض ويبدأ علاج المريض. في الأسلوب الكمي لتحديد الإصابة في الرقم القياسي العمود المقابل من البكتيريا الكشف سيتم تحديد. طبيب فقط يمكن تحديد مدى انتشار المرض ويصف العلاج اللازم.

في بعض الحالات، على سبيل المثال في تحديد الإصابة بالفيروس بواسطة PCR، مع نتيجة سلبية، وهناك حاجة لدراسات إضافية لتأكيد هذه الأرقام.

حيث للحصول على اختبار؟

حيث تمر-PCR تحليل في العيادة العامة أو مختبر خاص؟ لسوء الحظ، في المعدات المؤسسات الطبية البلدية والطرق وغالبا ما عفا عليها الزمن. ولذلك فمن الأفضل أن تعطي الأفضلية للمختبرات خاصة مع المعدات الحديثة والموظفين المؤهلين تأهيلا عاليا. وبالإضافة إلى ذلك، في عيادة خاصة تحصل على النتائج بشكل أسرع بكثير.

في موسكو، العديد من المختبرات الخاصة تقدم تحليل PCR لالتهابات مختلفة. على سبيل المثال، في مثل هذه العيادات باسم "فيتا"، "عيادة المتكاملة"، "العائلة السعيدة"، "البولية برو"، التي نفذت تحليل PCR. سعر المسح هو 200 روبل. لتحديد العوامل المسببة للأمراض.

ويمكن أن نخلص إلى أن تشخيص الأمراض المعدية عن طريق PCR في معظم الحالات هو وسيلة سريعة وموثوق بها للكشف عن العوامل المسببة للأمراض في الجسم في المراحل المبكرة من العدوى. ومع ذلك، ففي بعض الحالات، لاختيار طرق أخرى لتشخيص المرض. تحديد الحاجة إلى مثل هذه الدراسة يمكن إلا أن يكون متخصص. يتطلب PCR تحليل فك التشفير أيضا النهج المهني. اتبع نصيحة طبيبك ولا تعطي الاختبارات الخاصة بهم، والتي لا يحتاج إليها.